Diagnóstico de la infección y detección de la resistencia a antibióticos en Helicobacter pylori
En la década del ochenta, dos investigadores australianos (Robin Warren y Barry Marshall) aislaron e identificaron organismos semejantes a las Campylobacterias a partir de biopsias gástricas de pacientes con desórdenes gastroduodenales Al inicio, este microorganismo fue ubicado en el género Campylobacter , pero más tarde, en 1989, fue separado y ubicado en un nuevo género, Helicobacter . Helicobacter pylori presenta una distribución mundial heterogénea; en países subdesarrollados, del 70 al 90% de la población está infectada con está bacteria, mientras que en los países desarrollados la prevalencia de la infección oscila entre el 25 y el 50%. No se ha determinado claramente el modo de transmisión, pero casi con seguridad, la infección es consecuencia de la ingestión del microorganismo Por otro lado, el período de transmisión tampoco está del todo claro, ya que al ser la infección vitalicia, los sujetos infectados podrían, potencialmente, ser infecciosos durante toda su existencia. Se admite actualmente que la colonización persistente de la mucosa gástrica por H. pylori es causa de gastritis, úlcera gástrica y duodenal y también resulta un factor de riesgo para el desarrollo del cáncer del tejido linfoide de las mucosas y del cáncer gástrico. Teniendo en cuenta todo lo anterior, resulta de vital importancia para la salud del ser humano la detección y el tratamiento eficaz de este patógeno. Actualmente se dispone de una amplia variedad de técnicas para la detección de este microorganismo. Se pueden realizar métodos directos, que detectan la presencia de la bacteria, sus proteínas o el genoma de ella (cultivo, tinciones histológicas, técnicas moleculares y antígenos en heces), o indirectos, que estudian alguna característica de la misma (prueba rápida de la urea, prueba del aliento con urea marcada, técnicas serológicas). El tratamiento de la infección producida por H. pylori es complejo y el objetivo principal al aplicarlo, es conseguir la completa eliminación del microorganismo. La terapia con antibióticos ha resultado satisfactoria en la erradicación de esta bacteria, para lo cual han sido necesarias las triples o hasta cuádruples terapias. Estos regímenes terapéuticos están basados en la combinación de fármacos antisecretores, principalmente inhibidores de la bomba de protones (omeprazol, lanzoprazol, pantoprazol, etc.) o antagonistas de receptores H 2 (ranitidina, famotidina, etc.) con antimicrobianos (claritromicina, amoxilcilina, metronidazol, tetraciclina, entre otros). Sin embargo, el principal inconveniente de estos esquemas terapéuticos, es la aparición de cepas resistentes a los diferentes antibióticos, lo que disminuye significativamente la eficacia de las terapias. En este trabajo se presenta una detallada explicación de todos los métodos empleados en el diagnóstico de H. pylori , así como se discuten las ventajas y desventajas de cada uno de ellos. Además, se hace un análisis de las tasas de aparición de resistencia en los aislados de este microorganismo y se explican los mecanismos por los cuales esta bacteria se hace resistente a los antibióticos y los métodos con los que se detecta la aparición de resistencia en H. pylori .
Diferenciación rápida de microorganismos mediante Electroforesis de Campos Pulsantes en minigeles
Dra. Lilia Lopez-Canovas. Departamento de Biología Molecular. Centro de Neurociencias de Cuba.
Las enfermedades infecciosas constituyen un problema de salud en la actualidad debido a la capacidad de los microorganismos de mutar y adquirir resistencia a antibióticos. Una estrategia para controlar la diseminación de los patógenos consiste en emplear técnicas de tipificación molécular para diferenciar las cepas de los microorganismos. El análisis del ADN cromosomal de bacterias mediante Electroforesis de Campos Pulsantes (ECP) es considerado el ‘estándar de oro' para la tipificación molecular de las cepas aisladas durante un brote infeccioso, pues esta técnica brinda información para determinar la relación genética existente entre aislados de una misma especie.
En esta conferencia se mostrarán los fundamentos de la ECP en minigeles, los métodos de laboratorio asociados a la metodología para preparar las muestras y los últimos avances de los mismos. También se mostrarán los equipos y kits de reactivos cubanos desarrollados para esta finalidad (Guefast, BactKit y LevtKit) y se comentarán sus ventajas y facilidades para la tipificación, tales como la reducción del tiempo de análisis y de los costos.
El sistema cubano Guefast y sus kits ha sido empleado exitosamente en el análisis rápido y poco costo de cepas de P. aeruginosa , V. cholerae , Aeromonas spp , E. coli , S. aureus, Enterococcus faecium, E. histolytica y S. cerevisiae y para la caracterización de brotes de estos microorganismos.
Curso: Diagnóstico Rápido en Microbiología Clínica,
Antecedentes, actualidad y perspectivas.
Las posibilidades de los métodos rápidos en Microbiología comienzan a evidenciarse a la altura de los años 80, sumarisándose fundamentalmente a través de los eventos de RAMI, donde se incluían también aspectos del diagnóstico inmunológico. Puede decirse que la rapidez en el diagnóstico propició el desarrollo de la miniaturización y la automatización, aunque la esencia estuvo enmarcada en propiciar un reporte rápido que permitiera incrementar la productividad de las instalaciones dedicadas a producciones biotecnológicas. En lo relativo a la Microbiología Clínica , el tiempo del reporte intenta reducirse al máximo posible para lograr una mayor participación y efectividad de los resultados en el tratamiento del paciente aquejado de una infección bacteriana. Esto se ha logrado en términos generales, a través del desarrollo de diferentes sistemas, equipos y diagnosticadores. En la actualidad, las ventajas económicas de estos métodos han sido bien definidas, las sociales están limitadas a la existencia de redes aisladas en determinados países, que han suministrado un volumen importante de información, pero no se ha logrado la solución a la altura de la problemática, que se considera global, de acuerdo a su extensión, debido principalmente a limitaciones organizativas y económicas.
En perspectiva se plantea que los resultados derivados del desarrollo de las Nanotecnologías, permitirán el surgimiento de nuevos sensores y diagnosticadotes de gran sensibilidad que deberán acortar significativamente los tiempos del diagnóstico.
En el curso que se plantea se incluyen aspectos relacionados con un Sistema que utiliza una concepción nueva, que pretende una solución global a la problemática planteada, relacionada con el Diagnostico Rápido Microbiológico. Se incluyen conceptos de costo beneficio y soluciones que integran aspectos clásicos para un abordaje más racional que llega hasta el nivel primario de salud.
Se discuten varias tecnologías que deberán enfrentar en el futuro los retos vigentes de la Microbiología , intentando un diagnóstico en un tiempo menor a la respuesta del paciente séptico.
Importancia del diagnóstico microbiológico en la prevención de la resistencia antimicrobiana.
Lic. Leonora González y Dr. Carlos Vallin ( Centro de Química Farmacéutica )
La resistencia bacteriana constituye uno de los mayores retos de la humanidad y particularmente de la ciencia médica, ya que muchas de las bacterias causantes de las infecciones más comunes, actualmente han alcanzado niveles de resistencia alarmantes, convirtiéndose prácticamente en infecciones intratables; lo cual nos obligan a tomar acciones que tiendan a limitar su diseminación y reducir el impacto en la morbi-mortalidad que provocarían las mismas de llegarse a transformar en un problema generalizado. El retorno a la era preantibiotica, es un riesgo potencial que nos concierne a todos, y que no se limita a un país en particular. En este sentido es que la vigilancia activa de los patrones de susceptibilidad antimicrobiana constituye una de nuestras principales armas de defensa contra la diseminación de resistencia en un hospital, en una comunidad, en una región y aún más de manera más ambiciosa en un continente o en el mundo.
Dentro de las bacterias gram positivas el Staphylococcus aureus está reconocido como uno de los patógenos humanos más importantes, responsable de un gran número de infecciones; en la actualidad más del 90% de los Staphylococcus han desarrollado resistencia a la penicilina en el mundo, sin embargo muchas cepas mantienen sensibilidad a penicilinas estables a penicilinasas como la oxacilina y meticilina, las cepas resistente a estos antibióticos históricamente se han denominado MRSA y su detección en el laboratorio resulta muy difícil, por la presencia de dos subpoblaciones una sensible y otra resistente; la importancia de su detección es debido a su alto patogenicidad, a su alta trasmisibilidad y su limitadas opciones de tratamiento. El Comité Nacional para la Normalización de los Laboratorios Clínicos (NCCLS), actualmente denominado Instituto de Normalización de Laboratorios Clínicos (CLSI) recomienda las pruebas de detección del MRSA utilizando el disco de cefoxitina, las pruebas de aglutinación en látex para PBP2a, o placas con agar Mueller-Hinton suplementado con NaCl (4% w/v; 0.68 mol/L) y 6 µg/ml of oxacillin como método alternativo. La reacción en cadena de la polimerasa (RCP) es el método molecular que se utiliza para la detección definitiva del gen mec A, solo presente en las cepas intrínsicamente resistentes a oxacilina.
En el caso de las bacterias gram negativas los microorganismos productores de beta-lactamasas de espectro extendido (ESBL), representan el principal problema para la terapéutica clínica, el incremento de la producción de estas enzimas ha traído como resultado la limitación de las opciones terapéuticas, denominando a estos patógenos emergentes. Las pruebas de susceptibilidad de rutina que se realizan actualmente en los laboratorios clínicos para detectar las cepas productoras de ESBL, presentan fallos, debido a la gran variabilidad de afinidad de estas enzimas a los diferentes sustratos y el efecto inoculo; Las NCCLS recomiendan el screening de aislados de E.coli y Klebsiella spp con una CIM = 2 µg/ml frente a cefalosporinas de espectro extendido como potenciales productores de ESBL, y cuando se usa el método de difusión con discos un aumento en el diámetro de la zona de inhibición > 5mm, con el disco que presenta ácido clavulanico, este método falla, pues podría no detectar ESBL en las cepas que presentan una débil inhibición a los inhibidores de betalactamasas, por esta razón se han desarrollado varios métodos para confirmar la presencia de ESBL, entre los más usados esta la técnica de la doble difusión con discos, la técnica de E-test y la técnica de la sinergia con inhibidores de betalactamasas. La reacción en cadena de la polimerasa (RCP) es el método molecular que se utiliza para la determinación del tipo de betalactamasas que están presente en las mismas .